Método Western Blot

Método de identificación de proteínas: WESTERN BLOT
WESTERN BLOTTING
Es una técnica de inmunodetección que se utiliza para identificar proteínas.
Se basa en la separación de las proteínas de una muestra en función del tamaño mediante una electroforesis en condiciones denaturantes. Posteriormente son transferidas a una membrana, donde son reconocidas mediante anticuerpos específicos contra la proteína que deseamos detectar.
Permite determinar la presencia y cantidad relativa (técnica semicuantitativa) de proteínas presente en diferentes muestras.
PASOS A SEGUIR PARA REALIZAR UN WESTERN BLOT
1.- Obtener extracto de proteínas a partir de cultivos celulares o tejidos.

2.- Separación de proteínas mediante electroforesis en condiciones denaturantes.

3.- Transferencia de las proteínas a una membrana (generalmente de nitrocelulosa)

4.- Bloqueo de la membrana

5.- Adición de un anticuerpo primario contra las proteínas que se quieren detectar

6.- Reconocimiento del anticuerpo primario

7.- Revelado